徕卡显微镜仪器

徕卡显微镜仪器

徕卡显微镜的标本制备方法

徕卡生物显微镜70年代在探针技术上有两大进展，*是将透射电镜与x微区分析结合*第二是固态能量色散x一线探测器的应用。这便使得操作人员可将一细电子束准确地置于某细胞器内，使探针电流控制在几个nA范围内，减少了对标本的损伤，提高了像的质量。为此，对标本的制备提出了更高的要求。几个实验室不约而同地在探索如何在保存超微结构的同时也保存元素成分在原位而不移动或丢失。HaH实验室的工作人员研究肌细胞线粒体对钡的摄取，他们发现用醋酸铀染色后线粒体中只有铀而无钡，只有在不经染色的标本中线粒体内才有钡。他们在研究鸡胚红细胞核中的钠和其它电解质时，发现胞核内钠浓度几乎与胞外介质无差别。但他们对标本进行冰冻切片和冰冻干燥处理后，发现上述结果是错误的。因此Hall等认为标本制备的*方法是将组织立即冰冻（即粹冷固定）．然后用徕卡冰冻切片机做冰陈超薄切片。或对冰冻超薄切片直接观察分析，或将其冰冻干燥后再观察。他特别提出在分析组织的细胞外空间成分时，用未经干燥的冰冻超薄切片直接分析。

徕卡生物显微镜由于组织未经四氧化钥固定和染色，在经过冰凉固定后结构虽得以保存．但反差相当差。人们又想到是否可用低温置换固定或组织经冰冻干燥后再包埋、切片及染色以提高反差，增进像的质量。R加s实验室在此方面做了较深入的工作。他们以大鼠胰腺外分泌细胞不同部位的电解质分布为观测对象，比较几种标本处理方法的优劣。首先对大鼠做主动脉灌注，然后对胰腺作原位冰冻固定．或移出后做冰冻固定。他们对冰冻固定后的胰腺用自制的装置做以下几种处理；1．作多聚甲醛和四氧化俄低温置换固定及树脂包埋（Fs）；2．低温干燥后进行树脂包埋（四）和L冰冻超薄切片后进行冰凉干燥（cs）。然后分别对细胞的顶部胞浆、基部脑浆、酶元颗粒及钱粮体中的Ha、M8、P、s、酗、K及Ca做定量测定（删1／k8drywt）。其结果如表lo一1所示。由表可见，几种方法的结果十分不同。低温置换固定后包埋使电解质丢失zui多。即使低温干燥后做树脂包埋也有明显丢失，特别在顶部及基部胞浆中磷和钾丢失zui多。RoM等认为是由于使用了高度疏水的sPun和Epn树脂包埋时，使磷脂提取，质膜损伤后胞内可移动的钾及其它成分漏出所致。因此，RM的结论是对于研究元素在细胞内不同部位及细胞器中的分布而言，组织冰冻固定、冰冻超薄切片及随后的冰冻干燥是的方法。

徕卡显微镜的电子光学系统

徕卡生物显微镜相当于扫描电子显微镜的电子光学系统‘所不同之处是：L出射的电子束束流强度要大，而且要稳定。电子束直径一般为iP、不能因缩小电子轰击区而过分缩小电子束直径，因为束流强度与京的半径8／3次方成正比。2．发射电子之间能量的离散要小。因此往往采用热电子发射的三极电子枪。3物镜的中心不能太小。因为X射线以大角度射出，为了提高谱仪效率也必须大角度收集。因此物镜线圈所占空间要大为缩小。办法之一是用小线圈透镜，通强电流。但电流强产热多，就必须用冷阱冷却物镜。

徕卡生物显微镜生物医学标本常用冰冻超薄切片。由于x射线收集时间长达几十秒甚至100秒。束流强度很大的电子束在这样长的时间内轰击标本会把标本烧毁，因此必须注入液氮，使标本温度在一800c以下。诺仪可对待征x射线进行波长及能量分析。进行波长分析时的被语仪主要是合适的分光晶体，在一定角度使x射线产生衍射。目前多用的是对特征x射线进行能量分析的能谱仪。电镜室常用的是51（u）x射线能诺仪。它的探测器是si（H）二极管理漂移硅型）。这种半导体探测器可以看作一种“固体电离室”。当x射线进入探测器后，在半导体的灵敏区内损耗能量产生电子一空穴时，将它们收集后可形成电脉冲记录下来*由于si（Li）半导体的灵敏区大，所以探测效率高。又由于产生一个电子一空穴时所需的平均能量很低，所以这种探测器灵敏度和统计特性都比较好。s1（Li）能谱仪的分析速度快，可以同时分析和确定样品中含有的原子序数z＞11的所有元素。虽然该类能诺仪的缺点是能量分析率低，约150ev（波谱仪约5ev），但由于快速分析及效率高等突出优点，目前已成为扫描电镜和透射电镜上的主要附件。能谱仪都与计算机连用。荧光屏上不但显示特征x射线谱，而且计算机技能量分布依次给出元素名称及浓度。

备注:徕卡显微镜仪器结构特点部分文章由北京中仪光科科技发展有限公司编辑上传。