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中仪谈-荧光显微镜

发布时间:2011-12-06   点击次数:1600次

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荧光显微镜是一种对能发荧光的物质,或经荧光色素染色后能发荧光的物质进行观察的显微镜。它有如下特点:

1.它以紫外光或紫单色光激发标本的荧光。因紫外光是不可见光,故由标本发出的荧光与背景反差很大。荧光显微镜通常是在黑暗的背景下观察彩色图像的,而普通显微镜是在亮的背景下观察较暗的样品的c荧光显微镜的对比度约为普通显微镜的100倍,因此可观察到用普通显微镜看不到的结构和细节。

2.用肉眼或普通显微镜观察经荧光色素染色的样品对,只可看到整个标本仅以同一颜色着色。而用荧光显微镜观察时,标本会发出染色色素特有的荧光.呈现出标本的彩色图像,易于鉴别,可减轻眼睛的疲劳。

3.用荧光色索染色,方法简单,制作标本容易.有利于快速工作。

4.用于染色的荧光色素只要很低的浓度(如1:100000)就能发出明亮的荧光,一般对机体无毒,故有利于活体观察,如研究功能器官的变化过程和细微结构.某些代谢过程的变化等等。

5.利用荧光还有助于分析物质的化学成分。例如,组织中有些重要成分能与药物起作用而发荧光,据此可鉴定它们的存在或定位。

荧光显微镜装置由发出强紫外线的光源、可提供一定波长范围激发光的激励滤光片、适于观察荧光图像的显微镜和提供相应波长范围荧光的截止滤光片4个部分组成。透射型荧光显微镜和落射型荧光显微镜的光学系统分别如图3—28(a)和图3—28(b)所示。

日前世界各国已生产出有各种特色的荧光显微镜。按照照明装置和观察显微镜之间的联结方式可分为分离型照明装置、配装闭合型照明装置、内装固定照明型专用显微镜3种类型。

在分离型中,照明装置与显微镜分开,可独立配置,如配合手持显微镜使用截止滤光片可直接观察荧光。该型制造简便,价格低,但若不小心碰撞,容易使光轴不重合,造成偏位,调整较困难,而刀在照明装置与显微镜之间易有紫外线泄漏至光路之外。用于荧光抗体法时,若亮度不充分,光轴的少量偏位就会妨害观察,使用时应格外注意。

配装闭合型中,显微镜装置在照明装置的底座上,显微镜固定于底座,所以比分离型易调整光轴,稳定性好。但其灵活性差,不使用于手持显微镜。该型的照明装置配用同一厂生产的显微镜才能发挥zui佳效能。另一优点是比分离型紫外漏光少,如配用普通标准型显微镜,装上截止滤光片,也可用于荧光观察,且这样组合的装置价格较便宜。

内装固定型是将光源、照明光学系统、各种滤光板及观察显微镜组成—体,装于坚固的镜体中,是专用的荧光显微镜,其光轴更合完善,调整时不必担心偏位,而巳激励光的漏光极少。它是荧光观察中zui适用的显微镜,但价格较高。

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