徕卡荧光显微镜工作的性能特点
一般显微镜的光学元件,大都采用普通光学玻璃制造。它们对3000A以上的长波紫外线和可见光能很好地透过,因此完满足一般徕卡荧光显微术的要求,只是在个别情况下,当标本必须用短波紫外线激发时,才需用石英玻璃或特种玻璃的聚光镜和反射镜,这时载玻片也必须是特制的,但在透射光显微术时,物镜和目镜只需用普通光学玻璃即可。如在反射光显微术时,则物镜必须能透过紫外光的。现就徕卡荧光显微术的特点,介绍一下徕卡荧光显微境的性能特点。
(1)徕卡反光镜其反光层以镀铝为好,因为铝对紫外光和可见光的紫蓝区吸收少,反射率达90%以上,而镀银的反射率只达70%,另外应采用外反射,以避免光线来回经过玻璃而引起损失。同时要使用平面反光镜而不使用凹面反光镜,这样使光源射来的光线基本平行。
(2)徕卡聚光器聚光器有三种;明场聚光器、暗场聚光器和相衬荧光聚光器。
①明场聚光器假如标本可用较长的光波来激发成荧光,则可用徕卡阿贝聚光镜,而微弱的荧光或须用短波紫外光作光源的话,则必须用石英玻璃和荧石玻璃等材料制作的聚光镜,否则,紫外光将会全部被普通玻璃所吸收。另外,由于徕卡油浸镜头的香柏油会自发荧光,会扰乱观察,所以不宜使用,必须使用不发荧光的化学纯甘油或檀香油等。
②徕卡暗场聚光器由于使用暗场聚光器时,激发光不直接进入物镜,而不致直接射入眼中,这样激发滤片可以大大减薄,从而显著地增大了激发光的强度,抑制滤片也可以很薄,甚至可以不用。
由于徕卡暗场荧光显微术时,它的背景是黑的,固增强了荧光图象的亮度和反衬度,这样,不仅提高了图象的质量、观察舒适,而且还能观察出明场观察时分辨不出来的细微颗粒,因此具有超显微术的意义。
(3)徕卡相称荧光聚光镜它与普通聚光器相同,只是它的透镜能透过紫外光,如与相衬物镜配合使用,则可作相衬显微术,也可作荧光显微术,在同时有两个光源(一个是汞灯作为荧光激发光,一个是白炽灯作为相衬照明)或者是一个光源通过适当安排分成两条光路。在这样的情况下,则可同时进行相衬,荧光联合观察,既能看到荧光图象,又能看到相衬图形,在某些情况下,有助于目标的定位和结果的正确判断。