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徕卡冰冻式切片机切片制样方法

发布时间:2013-08-27   点击次数:1767次

 徕卡冰冻式切片机切片制样方法

 
电镜样品制备技术直接影响样品的结构和反差。制备高质量的超薄切片,是发挥透
 
射电子显微镜优良性能的前提。透射电子显微镜的分辨率理论上可达到o.3nm左右,
 
但是六于样品制备技术的限制,分辨率很难达到理论值。对于生物样品来说,一般只能
 
达到2nm的水平。
 
高质量的超薄切片基本特征:①样品应该能耐受电子束的强烈照射.不变形和升华
 
等。②能进行屯了染色.提高反差。③l50一100kv加速电压范围内,切片厚度在
 
50—loonm。④样品必须彻底下燥,以保持电镜L作状态F不损伤。
 
超揍切片技术包括取样、固定、脱水、渗透、包埋、超薄切片、电子染色、镜检等
 
制样步骤。其中取样、固定、脱水、渗透、包埋等过程与半博团片制样方法相同,下面
 
重点介绍超薄切片的准备、超薄切片和电子染色等过程。
 
一、徕卡冰冻式切片机切片制样步骤
 
1.铜网清洗:超薄切片要放在载网上才能进行染色等操作,并zui终放到电镜中观察。载网是用元磁性金属材料做成的,厚50Pm,直径一般为3咖,也有2皿的。一般用铜材料,所以又叫铜网。在酶组织化学或免疫细胞化学中要用金网和镍网,载网有各种形状。可根据样品和实验需要,选择载网的材质、形状和孔眼的大小。铜网主要功能是承载支持膜和样品。当受到电子束照射时,支持膜不易破裂*照射到铜网网孔中的电子,穿过样品,通过透镜成像。碰到铜网载条上的电子,被传到地,不参与成像,因此铜网还有把样品上的热量传走,减少样品的热漂移。铜网要经过清洗,方可使用。目前清洗的方法主要有下列几种:①超声波清洗法:将用过的铜网放在盛有95%乙醇的烧杯里,置于超声波清洗器(其内有水)中,在800一1000w下清洗30min。将使用过的铜网上的支持膜及超薄切片等洗去。然后用蒸馏水清洗数次,再在95%乙醇中清洗,zui后放在垫有干净滤纸的培养皿中烘干.镜检,备用。②酸碱清洗法:将用过的铜网放在一培养皿中,倒入一些浓硫酸或浓盐酸,不断地摇动(3—5min),直到铜网发亮为止。然后先用自来水,后用蒸馏水洗几次,再放在95%乙醇中清洗,zui后放到垫有干净滤纸的培养皿中烘下,镜检,备用。也可将铜网放在盛有10%NaoH的小锥瓶或试管中煮沸数分钟,然后用水洗,干燥、镜检,备用。
 
备注:徕卡冰冻式切片机切片制样方法由北京中仪光科科技有限公司编辑整理上传。
 
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