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徕卡倒置显微镜的扫描电镜

发布时间:2013-12-17   点击次数:1165次

徕卡倒置显微镜的扫描电镜

徕卡倒置显微镜所有的扫描探针显微镜都具有某些共同特点。所有的仪器都有一个探针和一个观测表面。两者相距十分近。徕卡体视显微镜通过某种压电装置,使两者相对扫描。为检测探针与表面的相互作用,还需要一个电路装置。这便是扫描探针显微镜的大致结构,而探针与表面相互作用的性质便决定了扫描探针显微镜的类型。

徕卡倒置显微镜由于高分辨扫描电镜的间世,为用表面标记技术观察细胞表面形态和区别两类纫胞群与其表面形态相的机能提供了条件。用此技术方法可研究细胞表面抗原、受体的性质,分布及运动。在原则上,透射电镑与荧光显微镜用的免疫标记技术也适用于免疫扫描电子显微术。但由于徕卡倒置显微镜扫描电镜与透射电镜的成像原理不同,因此对免疫扫描电境术的标记物有些特殊要求。这些要求是:

1.清晰、容易识别的形状‘对透射电镜的标记物要求电子致密度高,扫描电镜的标记物电子密度不是重要问题,而形状是识别的重要因素。

2.大小适宜:一般而言扫描电镜分辨率低于透射电镜,此外扫描电镜标本要金屑镀膜,这都影响样品表面结构的分辨。因此标记物若太小、结构过于微细,就不能与样品表面固有结构区别,但标记物过于大,又不能明确定出去面抗原位置,因此标记物大小要兼顾以上两方面。

3.化学性质稳定,在标本处理过程中不会被损坏品制备过程中能牢固地结合。

4.对细胞表面的固有亲合力差。

如果样品以苯乙烯树脂做为包埋剂,徕卡倒置显微镜再行割断法做扫描电镜观察是十分方便的。因为苯乙烯聚合后,氧化丙烯及醋酸异戊酌等很容易将其溶解,多次更换溶剂便可将苯乙烯清除干净。因此,在制做透射电镜标本时,多做出几个包埋胶囊样品,待聚合后,按上述方法割断,将割断好的样品放在氧化丙烯中,约2小时后便可经酷酸异戊酷置换、临界点干燥。

除树脂割断法外,徕卡倒置显微镜尚有有机溶剂(酒糟、酷酸异戊圈等)割断法;水溶性包埋剂(二甲基亚矾、甘油等)割断法及其它(冷冻、氟里昂等)割断法,操作都很容易。再以酒精割断法为例:样品固定后用酒精脱水,当脱水完成后,将样品投入预先装有无水乙醇的胶囊中(避免出现气泡)。将胶囊放在低温装置内使乙醇固化。进行样品割断。割断的样品立即进入置于室温的无水乙醇中,待乙醇融化后移入醋酸异戊酷、进行临界点干保。

如果徕卡倒置显微镜应用高分辨率扫描电镜.金标记是理想的。铁蛋白虽然有高电子密度,但分子毕竟大小,因而应用有限。

徕卡倒置显微镜关于抗体的纯化与透射电镜所用的有关方法相同,抗体与标记物的偶联也不在此赘述。

备注:徕卡倒置显微镜的扫描电镜部分文章由北京中仪光科科技发展有限公司,编辑整理上传。

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