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徕卡生物显微镜的局限

发布时间:2013-09-10   点击次数:992次

徕卡生物显微镜的局限

徕卡生物显微镜的工作目标是对样品得到一个放大俄,使原来肉眼看不见的细节能变得清晰可见。这里有两个基本的性能指标:一是分辨率极限,二是zui高有效放大倍数。分辨宰是分辨物体细节的zui小极限。仪器可分辨的zui小细节经适当放大后,变成人眼所能看清者。显然,如果超越了仪器分辨率的能力,即使进一步提高放大倍数,也不能让人清晰看到更小的细节。这种现象必须借助于光的波动学说来解释。

徕卡生物显微镜中所用的可见光源是波长为400一800nm的电磁波。波传播的特性之一是衍射。衍射就是波遇到障碍物时能偏离直线传播的性质。根据基础物理知识可知,由于实际光学仪器都有限制光束的“窗口”(光学显微镜中的“窗口”就是物镜边缘所限制的透光范围),它造成的衍射效应会使每个物点形成的像都是有所扩展的衍射光斑。靠得太近的像点彼此重登起来,会使画面中的细节变得模糊不清。光学显微镜中还有一些像差(如球差和色差等)也会使像点展宽,但它们大多可以校矫正。所以衍射差就成了限制光学显微镜分辨率的*重要因素。

根据Huy8en分FmsMl原理可以得出:一个物点所形成的衍射像斑是一种强度大部分(约84%)集中在中心圆斑,而周围伴有强度逐渐减弱的若干离散同心环的衍射花样。中心圆斑(也称A卸因斑)的半径。像方物镜孔径角或电子束半张角。光学仪器中通常采用Rayl出gh

判据作为分辨率的标准,即当一个囚斑像约中心刚好落在另一相邻圆斑像的边缘上时,这两个恰好能被分辨。因此图像上可分辨的zui小距离众就是Airy团斑的半径。灯是显微镜物镑所决定的图像放大倍数),便可以把像上的分辨率品转换成对物方样品的分辨率成。

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