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徕卡荧光显微镜的主要组成部分

发布时间:2013-08-22   点击次数:984次

 徕卡荧光显微镜的主要组成部分

 
徕卡荧光显微镜依据光路可分为透射式和落射式两种,现今徕卡新型荧光显微镜多为落射式荧光显微镜,某些徕卡大型荧光显微镜中兼有透射利落射两种方式的激发光路。①透射式荧光显微镜,激发光源是从标本下方经过聚光镜穿过标本材料来激发荧光,适于观察对光可适的标本。其优点是低倍镜时荧光强,而缺点是随放大倍数增加其荧光减弱。②落射式徕卡荧光显微镜,是近代发展起来的新式荧光显微镜,其激发光源是从标本上方经过套在物镜外用的特殊的垂直照明器,从物镜周围落射到标本上,光路中需加上一个双色束分离器,它与光轴呈45。角,激发光被反射到物镜中,并聚集在样品上,样品所产生的荧光以及由差玻片表面等反射的激发光同时进入物镜,即用同一物镜作为聚光器和收集荧光的物镜。由于不必透过载坡片,减少了激发光的无效吸收,提高了对激发光的利用率。如换用不同的激发滤片/双色束分离器/阻断滤片的组合插块,可满足不同荧光反应产物的需要。徕卡荧光显微镜的优点是视野照明均匀,成像清晰,放大倍数愈大,荧光愈强。这里我们主要介绍落射式荧光显檄镜的构造。
 
(一)光源
 
受检标本所能发出的荧光强度通常取决于激发光源的强度。由于荧光物质的量子效规格,由启动装置校制,其使用寿命与启动次数和工作时间密切相关o
 
(二)滤片系统
 
滤片的正确选择是获得良好荧光观察效果的重要条件,包括激发滤片、阻断滤片热滤片和紫外线吸收滤片等。
 
1.激发滤片激发滤片装在光源和标本之间的滤片滑板中,其作用是吸收光源中波良较长的可见光,使短于一定波江的光波通过,作为徕卡荧光显微镜的激发光。各类徕卡荧光显微镜使用的激发滤片型号、名称均不相同,但大都根据其光谱的基本色调命名,如W(紫外光)、B(蓝色)、Dv(蓝紫色)等,使用时应根据观察的荧光所需要的激发波长,选择某一种滤片并推入光路。
 
2.阻断滤片阻断滤片又称吸收滤X,是装在物镜和目镜之间的光路滑板中,其作用是吸收视野内末被标本吸收的激发光,允许标本内物质发射的荧光通过,以获得清晰的荧光图像和保护观察吝的眼睛。阻断滤片多采用数字作为标志,吸收短于滤片标记数字的波长光,允许长于标记数字的波长光通过。在进行荧光染色观察时,激发滤片和阻断滤片必须联合应用,要根据使用的荧光素有效吸收波长的不同,选用适当的滤片,即激发滤片允许某种波长范围的激发光通过,则相应的使用能吸收和阻断该波长范围的阻断滤片。
 
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