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徕卡荧光显微术的特点

发布时间:2013-05-20   点击次数:849次

 徕卡荧光显微镜的荧光显微术的特点

 
荧光显微术是普通显微术的重大发展。它具有独特的优越性。荧光显微术是在黑暗的背景下观察标本的彩色图像,有良好的反衬,故观察清楚、方便,易于鉴别,眼睛也不易疲劳。由于荧光染色素的浓度极稀(仪1:100000)便能发出明亮的荧光,因此一般油机体众说是无毒的,为活体观察,如研究功能器官的过程和细微结构,某些代谢过程的变化等,提供了广泛的可能性。另外,荧光色素染色法比较简单,时间短,标本制作容易,特别适于快速工作,如传染病的快速诊断等。
 
(1)荧光显微术方法的选择徕卡荧光显微镜可用明场或暗场方法,—般用暗场效果较好,因为它产生的现场背景是黑的,图象反衬强,不过没有明场方便。至于透射荧光还是反射荧光,一般来说,反射荧光应用范围广一些,它不仅适用观察普通标本片,而且还能现察不适明标本。
 
根据激发光波长的特点,荧光显微术可用紫外光或紫蓝光激发。紫外光的特点在可观察机体组织的自体荧光(如核酸及金刚石等)在组织学工作中便于区别背景荧光和染色目标的荧光。但缺点是:常常会引起标本荧光的光致淬灭,标本难以重复观察,并且使徕卡显微摄影发生团难。另外对活体标本有叨显的杀伤作用,对长期从事这项工作人员的暇睛也有伤害。特别是对绝大多数的荧光色素来说,紫外区不是zui大的光谱吸收风因而不能得到先分的激发。而紫蓝光却没有以上—些缺点,但不足的是不能激发组织的自体荧光,因此不适于研究组织的白体荧光结构。对于个别荧光色素,知罗达明R200,可用波长更长的蓝绿光作为激发光为佳。
 
(2)结果记录方法徕卡荧光显微术所观察的荧光图象,主要以两个指标判断结果,一是形态学特征,二是荧光的亮度。在免疫荧光工作中,尤其是这样,必须将两者结合起来综合判断,不可偏废。结果记录是根据主观指标或客观指标,但一般常是凭工作者目力观察的主观指标由于这是定性的观察,所以记录的度较差。
 
随着科学技术的发展,采用客观指标记录结果已开始应用。
 
①用不同厚度的中性滤片插入激发滤片和标本之间的光路中,以看荧光减弱的极度;
 
②不同标本以相同的曝光时间进行显微摄影,然后用光密度计测定胶卷图象;
 
③直接用荧光计测荧光色素和兔疫荧光染色的镜下标本;
 
④用光敏电池曝光表测定图象的亮度,或者与扫描装置结合,对视场的特定部位进行扫描等,如徕卡荧光显微光度计。
 
备注:徕卡荧光显微镜的荧光显微术的部分文章由北京中仪光科科技发展有限公司编辑整理上传。
 
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