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生物显微镜--自动和半自动影椽分析仪

发布时间:2012-01-13   点击次数:1502次

生物显微镜--自动和半自动影椽分析仪

对于上一章所提到的显微标本的面积测量,现在可以使用自动或半自动的影像分折仪来进行。这种仪器可以代替面积测定中费力而又费时的点计算或线性相交计算,并且与人眼睛的计数(zui高速度为5点/秒)相比具有极高的速度(大约为107点/秒)。当然在某些情况下,这种仪器的使用受到一定的限制。这是因为标本的特殊成分在其吸收特性上不能被仪器灵敏地区别,一个有经验的观察者一眼就能辨认的一些复杂因素,却不能转换为电子指示系统所能反应的简单的反差标准。不过使用更加新型的影像分桥计算机时,已经可以对在形状或图像的不同标淮基础上的物体部分进行区别;此外,一些发展的系统除了形态学分析外,还可以进行其他类型的测量,比如在电视像上所进行的显微保密度分析。目前用于生物显微镜测量的影像分析仪的类型是很多的,从比较简单的电视类型扫描积分器到高度复杂的多功能影像分析计算机,它们越来越普遍地应用于显微定量分析。

生物显微镜--根据标本被扫描的方法,影像分析仪器可以分为以下几个类型:

(1)飞点扫描。在这种系统中,标本是被一个小光点扫描的,这种扫描被用于较早类型的影像分析仪,由于种种原因在的系统中它已经被淘汰。

(2)像平面扫描。在这种系统中,扫描是由在显微镜像上移动的传感器完成的,这种像一般是用电视系统进行光度测量的。

(3)标本平面扫描。在这种系统中传感器和光源是静止的,而标本通过物台的移动被传感器所扫描。这种类型仪器的扫描速度一殷低于像平面扫描,因为物台的移动完全是机械运动。当然,扫描速度不经常是*五要的,而巳使用标本平面扫捞,往往可以研究比物锅的物场吏大的视场。

生物显微镜--自动和半自动影椽分析仪除了使用复杂的附属仪器进行特殊的分析功能而外,所有从简单的电视搞描到zui复杂的影像分析装置都可以完成下列基本功能:

(1)物体的计算。被测标本的像显示在电视屏幕上,并且物体必须显示出对于背景足够程度的反差。用一些比较复杂的方法,就可以得到微粒分布机率的微小物体直径和面积的数据。这种功能已经被应用于计算和分析灰尘微粒和悬浮的游离细胞。

(2)面积的测定。在面积的测定中反经是极其重要的,被测定的区域或结构与周围的环境相比必须具有明显的反差。而且既就是在这种条件下,由于与被测定区域具有相近反差的其他结构也会被计算在内,仍然不可避免地会出现一些误差。这可以用下画的例子来说明,图16.3(上图)表示一个像平面扫描的比较简单的影像分析仪。在电视接收机的荧光屏上显示着放大250倍的人帅组织的切片像,在团16.3中的左下图是与电视荧光屏上相同的生物显微镜像的放大视野,右下图是一个被转变为测定状态的相同的僚,显白色的测定区域可以被测出占整个荧光屏面积的百分比。由于使用一般的染色方法,肺组织和肺内空气之间的反差很高,因此利用这种测旦系统可以很好地完成这一工作。但是在这种非常简单的情况下仍然表现出一些明显的误差,一方面游离分布在空气空间的一些肺泡白血球同肺组织一样被测定,另一方面在横切面上显示中空的肺血管与空气空间一样被测定,当然在这种特殊的情况下误差的影响看来似乎并不是太大的,然而在某些情况下这种误差的影响就可能变得非常大。但是,这种误差可以用影像分析仪上酌光笔进行矫正,像在图16.3中的情况下可以“擦去”屏幕上的肺池白血球并且填满血管的中空部分,这样就可以得到比较的测量面积。

(3)相交点的测定。使用比较简单的电视扫描系统,可以对具有明显边界扫描线的物体进行相交点的电子计算,当然只以一个方向进行扫描移动所得到的读数是有局限性的,而通过转动物体来计算相交点,就可以得到比准较确的数值,并且可以探测一个物体中一定的方向性。

(4)其他参数的测定。在zui近十几年内,新发展的影像分析计算机能够进行范围广泛的参数分析。例如图形的辨认,具有一定特殊性能的物体部分的自动选择.并且已经有可能把影像分析系统用于显微密度仪和显微荧光计。

除了仪器之外,还应该注意使标本本身以zui清晰的形式向影像分析仪显示它的结构,当然这并不是说对于肉眼观察比较清晰的染包技术也一定适用于影院分析仅,有时候必须去发展在显微镜下并不具有的高反差,但在影像分析系统中却可以产生较高反羌的特殊技术。例如使用与字尔根染色技术相结合的荼酞黄一S染料,能够更有效地增大细胞和细胞核与周围介质的反差,更适合于影像分析中曲面积测定。

当然,既就是使用zui先进的全自动影像分析计算机,它们仍然小可能完全代替有经验观察者的眼睛和头脑,在许多情况下,点计算仍然是不可缺少的。

 

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