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体视显微镜-盖玻片的影响

发布时间:2011-12-22   点击次数:3521次

体视显微镜-盖玻片的影响

对于数值孔径在0.4以上的物镜来说盖玻片被包括在光学矫正之内,它成为像的形成中一个不可缺少的部分,因此我们在介绍物镜时必须讨论盖玻片的影响。

盖玻片的基本功能是对标本起保护作用,但是它的存在却影响到来自标本光线的光路。在使用于系物镜时,来自标本的光线在玻璃空气界面上被折射。从图3.6中可以看出,光线与光轴之间的角度愈大,这种影响也就愈明显,这种现象产生了一种很多方面与透镜的球面差(地说是负球面差)相似的效应。除了盖玻片外,在盖玻片下面的封藏剂(一般折射串接近于玻璃)也起一定的作用,但由于达层封建剂一般很薄,因此在引起这种光学现象中盖较片起着远为重要的作用。

从图3.6中还可以看出,盖玻片肋厚度会彤响这种效应,因此只有对于一定的盖破片厚度,物镜的矫正才是可能的。如果益玻片太薄或太厚,都会由于这种负球面差而使像模糊或降低像的质量。益玻片的据准厚度在国际上统一规定为0.17mm,因此,现在所有的物钥都是根据这个厚度的矫正而设计的。实际上我们所使用的孟玻片与0.17mm的标准值总是有相当的偏差,往往变动在0.145--0.185mm之间。而不同孔径的物镜,对于盖玻片厚度的要求有不同的可允许偏差范围,曲田的孔径愈大,这种可允许的偏差范围就短小(表5)。因此,当使用数值孔径低于o.4购物镜时,盖玻片本身的影响是无足轻重的;当使用数值孔径为0.5或0.6的物镜时,对于一般在0.145--0.185mm之间变动的益玻片厚度仍然是影响不大的;当使用较高数值孔径(o.75一o.95)的干系物镜时,在上述范围内变动的盖玻片厚度会对仍的质量产生很大影响,例如在使用数值孔径为0.90的物镜时,盖玻片厚度的0.01—0.02mm的差异就台明显地影响像的质量。

体视显微镜由于在标本和益玻片之间还有一层一定厚度的封蘸剂,这实际上增加了益玻片的厚度,因此所使用的盖玻片厚度必须薄于o.17mm,选择厚度在o.15一o.16mm之间的盖玻片。此外,在封藏切片时应注意不要把树胶滴得太多,也不宜使用过于粘稠的树胶,以免使树胶层太厚而降低像的质量。必要时还可以在封藏后立即用小重物在益玻片上适当加压,以排出过量的树胶。

对于在生物显微技术中广泛使用的5—7μm厚的石蜡切片,根据计算zui合适的益玻片厚度为0.155mm。

另一方面当用显微镜观察没有盖玻片的标本时,由于物镜球面差的过度矫正,具有较大孔径的物镜格会形成一个模糊不清的像,为此,现在已制造出用于不带益玻片标本观察用的特殊物镜,在这种物镜上标有“O”字样。

如上所述,体视显微镜由于盖破片的厚度很难都达到o.17mm的值,往往在o.145一o.185mm之间变动,因此现在已设计制造出数值孔径大于o.75的具有校正环的干系物镜(图3.7)。这种具矫正环的物镜对于在o.12一o.22mm范围之内的益玻片厚度误差部可以进行校正。在这种物锐简上装有环状调节装置,通过调节物镜中各组透镜之间的距离,从而校正由盖玻片厚度误差所产生的影响。在这种物镊的校正环上具有精细的刻度,对于已知的盖玻片厚度,可以预先在刻度尺上对猴相应的刻度。熟练的观察者,不用测定盖玻片厚度,只旋转校正环就能调节盖玻片厚度混差所引起的不良影响。如果在物镜上没有校正装置,可伸长的镜简(图1.3)可以在一定程度上用于盖玻片厚度的校正:当盖玻片太厚时可以缩短镜筒:当盖玻片太薄时可以伸长镜筒。

体视显微镜物镜

体视显微镜只有使用高倍干系物镜时,对盖玻片厚度的校正才是重要的。在使用油浸物镜时,由于标本和物镜之间的盖玻片和浸油具有相同的折射串,盖玻片的影响在像的形成中实际上是不起作用的。由于油泾物镜完全排除了盖玻片的影响,并且能适当地增大您的反差,其效果超过了相同质量的于系物镜,因此在zui近几年,人们对数值孔径为o.8—1.2、放大倍数在高倍干系物镜范围内(40一70×)的油浸物镜愈来愈感兴趣。

 

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