徕卡冰冻切片机 (frozensection)是一种在低温条件下使组织快速冷却到必定硬度,然后进行切片的办法。因其制造进程较白腊切片方便、简便,而多应用于手术中的快速病理确诊。制造一张出色的冰冻切片,确保切片质量的一起,又要前进手术中快速病理确诊的准确率,那么这跟对冰冻切片机的知道和选择有很大关系。下面就常用的徕卡冰冻切片机 的分类、原理做简略的拾掇和概括。
徕卡冰冻切片机首要分为两大类,即冰冻切片机(FreezingMierotome)和低温恒冷冰冻切片机(Cryostat)。
1.冰冻切片机
一般是由轮转式切片机或推拉式切片机加上致冷设备而成的。常用的致冷设备有二氧化碳冷冻设备和半导体冷冻设备。
(1)二氧化碳致冷器的基本原理是选用二氧化碳气体冻住组织。切片机往往与一个二氧化碳钢瓶相连,使气体能通向切片机的载物台,有的还可通向切片刀。切片时打开二氧化碳气门,气体即通过管道喷出。由于许多吸热,载物台(又称冷凝台)及其上的组织敏捷冷却,切片刀的温度也相应下降,即可切片。组织和切片刀的温度可通过恰当控制开关,改动二氧化碳气流的巨细进行调理。
(2)半导体致冷器的基本原理是运用Peltier效应。Peltier观察到当直流电通过两种不同的金属时,即在这两种金属接壤的一个面发生热量,另一面损失热量。根据这一原理做成热电微型元件,即将多个温差电偶按必定的顺序排列起来,构成一个较大的界面,当直流电通过期,电偶的一端发热,另一端致冷。将这种设备用于冰冻切片,可将温度比较精确地控制到-30℃士0.1℃,并可长久保持稳定。电偶吸热端和放热端之温差在必定规划内与电流的巨细成正比,电流越大,温差就越大。但电流超过必定规划后,温差反而下降。大温差时通过电偶的电流即为“较佳电流”,如果有循环水等散热办法将放热端予以冷却,则吸热端的温度将随之下降,半导体冰冻切片就是运用电偶的吸热端冷却组织,使之硬化而制造切片。
上述切片机都置于室温内进行切片,所以都具必定的局限性,如切片往往较厚,并且易与刀粘着,需要恰当娴熟的技巧才干取得满意的切片。
2.低温恒冷冰冻切片机
50年代中期,开端有人将低温恒冷冰冻切片机用于病理确诊,使冰冻切片的质量和速度都有了很大的前进。
低温恒冷冰冻切片机实际上就是将通过改进的切片机置于一个冷冻室内,与电冰箱致冷原理相同,运用压缩机通过氟利昂循环致冷。切片机的操作大部分在冷冻室外进行。现在常用的切片机为轮转式的。低温恒冷切片机又分为全封闭式和顶部开放式。顶部开放式的切片机上部有一大的滑动玻璃窗,通过此窗放入组织,调整切片机,进行切片。本机可以自在选择温度、切片厚度,制片敏捷,可以接连切片,染片质量可与常规白腊切片比美,并且组织内的生物活性物质保存出色,适用于组织化学、免疫荧光和免疫组织化学等染色。制片温度选择可按组织类型及切片厚度而定,大多数组织以-15℃~-20℃为宜,脂肪组织所需温度更低,可加用干冰冷冻。