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徕卡荧光显微镜本体

发布时间:2013-09-29   点击次数:1862次

徕卡荧光显微镜本体
    徕卡荧光显微镜是任何显微木的基本工具,它的主要作用是使被捡标本图象得到不同程度的放大。在徕卡荧光显微镜中,荧光光源装置是提供一定波长的激发光使被校标本受激发射荧光,再通过显微镜的物镜,B镜系统使荧光图象放大以供观察,因此,一般来说,任何显微镜都可以用于荧光显微术。不玖由于徕卡荧光显檄镜所放大的象是荧光图象,必须根据荧光产生和表现的特点,因此在使用方法—L略有讲灾。
    一般的徕卡荧光显微镜的光学元件,大都果用普通光学玻璃制造。它们对30 A以上的长波紫外线和可见光能很好地透过,因此完满足——殷荧光显微术的要求,只是在个别情况下,当标本必须用短波紫外线激发时,才需用石英玻璃或特种玻璃的聚光镜和反射执这时残破片也必须是特制晰但在进射光显檄术时,物镜和目镜只需用普通光学玻璃即可。如在反射光显微术时,则物镜必须能透过紫外光的。现就荧光显微木的特点,介绍一下徕卡荧光显微境备部分的性能特点。
    (1)反光镜  其反光层以镀铝为沉因为铝对紫外光和可见光的紫蓝区吸收少,反射率达90%以上,而镀银的反射串只达70%,另外应采用外反射,以避免光线来回经过玻璃而引起损失。同时要使用平面反光镜而不使用凹面反光鼠这样使光源射来的光线签水平行。
    (2)聚光器  聚光器有三种;明场聚光器、暗场聚光器和相衬荧光聚光器。
    ①明场聚光器  假如标本可用较长的光波来激发成荧光,则习,9阿贝聚光镜,而微列的焚光或须用短波紫外光作光源的话,则必须用石英玻璃和荧石玻璃等材料制作的聚光镜,否则,第外光将会全部被普通玻璃所吸收。另外,由于油浸镇头的香柏油会自发荧光,会扰乱观院所以不空使用,必须使用不发荧光的化学纯甘油或檀香油等。
    ②暗场聚光器  由于使用暗场聚光器时,激发光不直接进入物镜,而不致直接射入眼睛,这样激发滤片可以大大减薄,从而显著地增大了激发光的强度,抑制滤片也可以很薄,甚至可以不用。
    由于暗场荧光显微木时,它的背景是黑的,放增强了荧光图象的亮度和反衬度,这梆,不仅提高了图象的质量、观察舒适,而员还能观察出明场观察时分辨不出来的细微颐粒,因此徕卡荧光显微镜具有超显微木的意义。
    (3)相树荧光聚光它与普通聚光器相同,只是它的透镜能透过紫外光,如与相衬物镜配合使用,则可作相衬显微镜,也可作徕卡荧光显微镜,在同时有两个光源一个是汞灯作为荧光激发光一个是白炽灯作为相衬照明)或者是一个光源通过适当安排分成两条光路。在这样的情况T,则可同时进行相衬,荧光联合观鼠既能看到荧光图象,又能看到相衬图抵在某些情况T,有助于目标的定位和结果的正确判断。
徕卡荧光显微镜是普通显微术的重大发展。它具有独特的优越性。徕卡荧光显微镜是在黑阅内背景下观察标‘杠的形色图象,有良好的反刘,故观察清楚、方便,易哥:鉴别,眼睛也不员疲劳。由于徕卡荧光显微镜的荧光染色素的浓度极稀(仪1:I ooo00)便能发出明亮的荧光,因此一般油机体众说是无动的,为活体观察,如研究功能器官的过程和细微纠构,某些代谢过程的变化等,提供了广泛的可能性。另外,徕卡荧光显微镜的荧光色素染色法比较简轧时间路标木制作客只,特别适于快速工亿如传染病的快速诊断等。
  徕卡荧光显微镜——反射光荧光装置
  徕卡荧光显微镜对于观察透明度差的标本,以及各种活体组织时,需采用反射光荧光装置。徕卡荧光显微镜反射光荧光装置的特点是:从光源来的混合光射到干涉分光滤镜后,波长短的部分(荣外和紫蓝)由于滤镜上镀膜的性质而反射,当滤镜对向光源呈45。倾斜时,则垂直射向物镜,’经物镜射向标久使标本受到激发,这时物镇直接起看聚光器的作用,同时波长氏的部分(绿、黄、红等)能透过滤镜比因此不向物镜方向反射,滤镜起到了激发滤板的作用,由于标本的荧光是处在可见光长波区;故对滤镜也是可以透过的,因此能透射到目镜以供观察。根拇所需要激发光不同,干涉分光滥镜可以更换。
    徕卡荧光显微镜——荧光显微镜的持点
    徕卡荧光显微镜是普通显微术的重大发展。它具有独特的优越性。徕卡荧光显微术是在黑阅内背景下观察标‘杠的形色图象,有良好的反刘,故观察清楚、方便,易哥:鉴别,眼睛也不会疲劳。由于荧光染色素的浓度极稀(仪1:I ooo00)便能发出明亮的荧光,因此一般油机体众说是无动的,为活体观察,如研究功能器官的过程和细微纠构,某些代谢过程的变化等,提供了广泛的可能性。另外,英光色素染色法比较简轧时间路标木制作客只,特别适于快速工亿如传染病的快速诊断等。
    徕卡荧光显微镜的荧光显微术可用明视场改暗视场方洗,但—般用睹权场效果较好,因为它产生的现场背景是黑的,图象反衬强,过没有明视场方便。至于透射荧光还是反射荧光,一般来说,反射荧光应用范围广一以它不仅适用观察普通标刺,而且还能现察不适明标本。
    徕卡荧光显微镜根据激发光波长的特点,荧光显微术可用紫外光或紫蓝光激发。蒙外光的特点在观察机体组织的自体荧光<如核酸及金刚石等)在组织华工d:中便于区别背景荧光和染色目标的荧光。但陕点是:常常会引起标4;荧光的光致淬灭,标本难以重复观察,并且沙显微摄影发生团难。另外对活体标本有叨显的杀伤作用,对长期从事这项工作人员的暇睛也有伤害。特别是对绝大多数的荧光色素来说,紫外区不是zui大的光谱吸收风因而不能得到先分的激发。而紫蓝光却没有以上—些缺点,但不足的是不能激发组织的自体荧光,因此不适于研究组织的白体荧光结构。
    结果徕卡荧光显微镜所观察的荧光图象,主要以两个指标:刘断结果,一是形态学特征,二是荧光的亮度。在免疫焚光工作巾,尤其是这样,必须将两者结合起来综合判断不可偏皮。纠果记录是根据主观指标或客观指标,但一般常是凭工作者日力观察的主观指标由于这是定性的观察,所以记录的度较差。随着科学技术的发展,采用客观指标记录结果已经开始应用,有以下几点:
    ①用不同序度的中性滤片插入激发滤片和标本之间的光路中,以看焚光减驹的极度;
    ②不同标本以相同的陨光时间进行显檄摄影,然后用光密度计测定胶卷图象;
    ③直接用荧光计测荧光色素和兔疫荧光染色的镜下标本,
    ④用光敏电池漏光表Z;愧网象的亮度,或者与扫描装置结备对视场的特定部位进行扫描等,如荧光显微光度计。
备注:徕卡荧光显微镜——荧光显微镜的特点部分文章由http://www.chem17.com/st192462上传。

 

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