徕卡荧光显微镜的荧光显微术的特点
荧光显微术是普通显微术的重大发展。它具有*的*性。荧光显微术是在黑暗的背景下观察标本的彩色图像,有良好的反衬,故观察清楚、方便,易于鉴别,眼睛也不易疲劳。由于荧光染色素的浓度极稀(仪1:100000)便能发出明亮的荧光,因此一般油机体众说是无毒的,为活体观察,如研究功能器官的过程和细微结构,某些代谢过程的变化等,提供了广泛的可能性。另外,荧光色素染色法比较简单,时间短,标本制作容易,特别适于快速工作,如传染病的快速诊断等。
(1)荧光显微术方法的选择徕卡荧光显微镜可用明场或暗场方法,—般用暗场效果较好,因为它产生的现场背景是黑的,图象反衬强,不过没有明场方便。至于透射荧光还是反射荧光,一般来说,反射荧光应用范围广一些,它不仅适用观察普通标本片,而且还能现察不适明标本。
根据激发光波长的特点,荧光显微术可用紫外光或紫蓝光激发。紫外光的特点在可观察机体组织的自体荧光(如核酸及金刚石等)在组织学工作中便于区别背景荧光和染色目标的荧光。但缺点是:常常会引起标本荧光的光致淬灭,标本难以重复观察,并且使显微摄影发生团难。另外对活体标本有叨显的杀伤作用,对长期从事这项工作人员的暇睛也有伤害。特别是对绝大多数的荧光色素来说,紫外区不是zui大的光谱吸收风因而不能得到先分的激发。而紫蓝光却没有以上—些缺点,但不足的是不能激发组织的自体荧光,因此不适于研究组织的白体荧光结构。对于个别荧光色素,知罗达明R200,可用波长更长的蓝绿光作为激发光为佳。
(2)结果记录方法徕卡荧光显微术所观察的荧光图象,主要以两个指标判断结果,一是形态学特征,二是荧光的亮度。在免疫荧光工作中,尤其是这样,必须将两者结合起来综合判断,不可偏废。结果记录是根据主观指标或客观指标,但一般常是凭工作者目力观察的主观指标由于这是定性的观察,所以记录的度较差。
随着科学技术的发展,采用客观指标记录结果已开始应用。
①用不同厚度的中性滤片插入激发滤片和标本之间的光路中,以看荧光减弱的极度;
②不同标本以相同的曝光时间进行显微摄影,然后用光密度计测定胶卷图象;
③直接用荧光计测荧光色素和兔疫荧光染色的镜下标本;
④用光敏电池曝光表测定图象的亮度,或者与扫描装置结合,对视场的特定部位进行扫描等,如荧光显微光度计。