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徕卡生物显微镜的超薄切片的定量x射线微区分析

发布时间:2012-11-23   点击次数:1711次

徕卡生物显微镜的超薄切片的定量x射线微区分析

徕卡生物显微镜不论外源佐的还是体内存在的物质,作x射线微区分析时,除鉴定其成分外,还需给出“量”。这“量”(即浓度)有相对及两种表示方法。

徕卡生物显微镜为测试成分的浓度,L为测试成分的峰高tl为在分析区域内全部质量的x射线强度,即连续射线的高度。由于有机物与无机物的平均原子密度相差甚大,用超路切片100一200nm标本做分析时使出现了困难。因为待测试成分的质量相对很少.而来源于超薄切片,支持膜、金属网及标本托等的背景(即连续X射线)十分强,连续谱的计数与其成分原于序数的平方z”成正比,因而高原子序数的元素产生的连续语的强度要比有机物的连续诺强度大得多。如Oq(z=76)的连续诺强度比相同浓度的生物学材料的连续谱强度高100倍。因此便集中考虑以超薄切片(其主要成分为C,N.O和H)为背景,而不再考虑支持网,金属托等的影响。于是人们制各组成与所测试的样品相似的标准样品,将测试样品的特征x射线强度与已知浓度的标准样品特征x射线强度在相同测试条件下比较,便是徕卡生物显微镜超簿切片标本定量方法的基本原则。

徕卡生物显微镜为测试成分浓度,r5为标准样品的已知浓度,入及人分别为测试成分和已知成分的峰高。由于在生物学标本的较轻元素的浓度范围内,可以不做原子序数对连续谱效应的校正,因此上式可写为

徕卡生物显微镜一个重要的问题便是定Pd值,基本方法是制各生物标本的类似物。要求该类似物匀质,含有与生物标本同样的轻元素。外加一种元素r其浓度范围在生物标本所含的范围内,在电子轰击时应稳定,而且在100nm厚的切片中应有化学上的均匀性。这种生物标本类似物很多,如Na和k(NaCNS及KCNS)镕子Sp毗树脂,700C聚合后超薄切片,所余的聚合块涪于酵以定Na及K的浓度。再如牛血清白蛋白,牛胰岛京和Phmnun中均共价结合有已知化学计量浓度的5和尸。这些蛋白可做为含5和尸的生物标本类似钩”。但这些生物标本类似韧并不能包罗生物标本中所有的成分,往往是“类似物”。幸运的是如果已知某一种元素的H,其它所有元素的H/‘均能间接求出。因为一切生物材料的元素的连续谱都在相同的能带中,元素的u/x值有如此关。因此若徕卡生物显微镜测量出其它莱一元素的此g2了(Ej),其u7*很容易求出。当持测元素约Iyf已知后,将x射线信号输入检测系统,经计算机处理后,便可直接给出元素的浓度(m01A8)。

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