半薄的部分，可从cryoprotected生物材料的冷冻块切片在-90°C。徕卡冰冻切片机的使用这些路段的优点是subcellullar形态保存和改进的光学分辨率。化学固定的生物材料是cryoprotected浸泡在2.3米，蔗糖和浸泡在液氮中冷冻到标本引脚。切片是执行与调整，切较厚部分（0.3至1μm）的ultramicrotome的厚度控制在低温-ultramicrotome。一旦已取得的部分，他们是从使用蔗糖液滴的刀，但它们置于玻片上，而不是放在标本电网。
玻片上应注明对其中的部分将被放置标记的玻璃，洗，然后外套的玻璃面的钻石铅笔。用洗涤剂和水清洗后，他们可能会涂要么明胶，聚-L-赖氨酸或阿尔辛蓝。对于这些*，下降1％明胶被涂污在玻璃上使用的是第二张幻灯片和风干的幻灯片。对于其他两种方法，见下文。涂层的幻灯片，可确保部分粘在标签过程的幻灯片。
免疫标记的玻片上的冰冻切片。
浸入幻灯片，与部分，成Coplin含有PBS JAR。这将洗去蔗糖。
浸入到用含50毫米氯化铵在为了解渴自由醛基的幻灯片。
浸入到PBS的幻灯片，包含阻断剂（如1％明胶）。删除的幻灯片，幻灯片等的部分和他们周围的区域保持湿干表面。重要的是，部分没有干出来的。
把加入10μl-20μL稀释，离心抗体的上部分，在潮湿的气氛中离开15分钟到24小时。
抗体洗净，用新鲜的PBS（一个Coplin JAR）。
重复抗体孵育和洗涤步骤与二级fluoresceinated抗体（步骤4和5）。
安装在90％甘油的PBS的幻灯片，或冲洗水和含Moviol或Permount防褪色的化合物挂载。这将产生一个*性的装载荧光信号是不容易漂白，当暴露在紫外线下。
徕卡冰冻切片机与自体荧光的问题
如果所研究的材料是用戊二醛固定，然后自体荧光将出席。这可以由0.1％的PBS（pH值8）治疗的部分被删除。硼库存解决方案，可以无限期地储存在pH值12。在pH 7分子的半衰期为10秒。在pH 8的半衰期为100秒。
如果从组织的自体荧光，然后金或酶标记的抗体可以取代二次荧光抗体。在这样的抗体结合可以可视化使用银增强揭示的黄金，或产生酶细胞化学在组织切片的彩色反应产物。
聚-L-赖氨酸涂层玻片
在100毫升蒸馏水溶解聚-L-赖氨酸10毫克。
保留干净，标志着幻灯片，在这30分钟的解决方案。
无论是空气干燥，不洗或冲洗蒸馏水简要。
阿尔辛蓝玻片上的涂层。
0.5％阿尔辛蓝原液
这个解决方案1:100用蒸馏水稀释
在稀溶液中10分钟，浸干净，显着的幻灯片。
简要蒸馏水冲洗幻灯片。这洗之后，他们将继续略带蓝色。
晾干后方可使用，并且只使用新鲜配制的幻灯片。
