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显微镜检术介绍-金相显微镜

发布时间:2012-03-12   点击次数:1862次

显微镜检术介绍-金相显微镜

前面讲述了金相显微镜的光学原理以及附件,下面将分类介绍一下各类研究用镜检术。在材料研究领域,反射式明场显微镜得到广泛应用,在此基础上各种特殊的镜检方法也得到应用,如暗场,偏光,相衬,干涉,荧光,这些镜检方法在显微镜上均能同时实现。
一. 明视野观察(Bright field)
 明视野镜检是大家比较熟悉的一种镜检方式,广泛应用于病理、检验,用于观察被染色的切    片,所有显微镜均能完成此功能。在此不再赘述。
二. 暗视野观察(Dark field)
暗视野实际是暗场照明。它的特点和明视野不同,不直接观察到照明的光线,而观察到的是被检物体反射或衍射的光线。因此,视场成为黑暗的背景,而被检物体则呈现明亮的像。暗视野的原理是根据光学上的丁道尔现像,微尘在强光直射通过的情况下,人眼不能观察,这是因为强光绕射造成的。若把光线斜射它,由于光的反射,微粒似乎增大了体积,为人眼可见。暗视野观察所需要的特殊附件是暗视野聚光镜。它的特点是不让光束由下至上的通过被检物体,而是将光线改变途径,使其斜射向被检物体,使照明光线不直接进入物镜,利用被检物体表面反射或衍射的光形成明亮图像。暗视野观察的分辨率远高于明视野观察,zui高达0.02—0.004mm。
三.相衬镜检法(Phase contrast)
在光学显微镜的发展过程中,相衬镜检术的发明成功,是近代金相显微镜技术中的重要成就。我们知道,人眼只能区分光波的波长(颜色)和振幅(亮度),对于无色通明的生物标本,当光线通过时,波长和振幅变化不大,在明场观察时很难观察到标本。
相衬显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检,也就是有效地利用光的干涉现像,将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差,即使是无色透明的物质也可成为清晰可见。这大大便利了活体细胞的观察,因此相衬镜检法广泛应用于倒置显微镜。
1. 相衬镜检法在装置上与明场不同,有一些特殊要求:
( 1 ). 环状光阑(Ring slit):装在聚光镜的下方,而与聚光镜组合为一体——相衬聚光镜。它是由大小不同的环形光阑装在一圆盘内,外面标有10X、20X、40X、100X等字样,与相对应倍数的物镜配合使用。
( 2 ). 相板(Phase plate):装在物镜的后焦平面处,它分为两部分,一是通过直射光的部分,为半透明的环状,叫共轭面;另一是通过衍射光的部分,叫“补偿面"。有相板的物镜称“相衬物镜",外壳上常有“Ph"字样。
2. 相衬镜检法是一种比较复杂的镜检方法,想要得到好的观察效果,显微镜的调试非常重要。除此之外还应注意以下几个方面。
( 1 ). 光源要强,全部开启孔径光阑;
( 2 ). 使用滤色片,使光波近于单色;
四.微分干涉相衬镜检术(Differential interference contrast DIC)
微分干涉相衬镜检术出现于60年代,它不仅能观察无色透明的物体,而且图像呈现出浮雕壮的立体感,并具有相衬镜检术所不能达到的某些优点,观察效果更为逼真。
1. 原理
微分干涉相衬镜检术是利用特制的渥拉斯顿棱镜来分解光束。分裂出来的光束的振动方向相互垂直且强度相等,光束分别在距离很近的两点上通过被检物体,在相位上略有差别。由于两光束的裂距极小,而不出现重影现像,使图像呈现出立体的三维感觉。
2. 微分干涉相衬镜检术所需的特殊部件:
(1) 起偏镜
(2) 检偏镜
(3) 渥拉斯顿棱镜2 块
3. 微分干涉镜检时的注意事项
(1)因微分干涉相衬灵敏度高,制片表面不能有污物和灰尘。
(2)具有双折射性的物质,不能达到微分干涉相衬镜检的效果。
(3)倒置显微镜应用微分干涉相衬时,不能用塑料培养皿。
 

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